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人血清單向瓊脂擴散試驗的具體操作辦法

發布時間: 2015-04-30  點擊次數: 872次

人血清中IgG、IgA、IgM的測定應用與免疫球蛋白(IgG)廣泛地應用于免疫學及分子生物學中各個分支學科的研究領域,它即可作為大分子球蛋白用于生物化學的研究,也可以作為抗原用于免疫學和臨床醫學之中。本試驗主要用于檢查血清中各種免疫球蛋白和補體成份的含量。以下為單向瓊脂擴散試驗的具體操作辦法,為需要者提供參考,咨詢我司產品的具體價格。
   *、準備材料
IgG、IgA、IgM免疫板、參考血清、待檢血清、微量加樣器、量尺、紗布、生理鹽水、帶蓋方盤。
   第二、步驟
    1、稀釋參考血清及待檢血清:參考血清用0.5ml蒸餾水溶解后使用,參考血清、待檢血清稀釋按要求進行。
    2、加樣:將上述稀釋參考血清分別滴入相應的抗體免疫板的一排孔內,其余孔滴加待檢的稀釋血清,每個檢樣加兩個孔,每孔滴加10微升。
    3、繪制標準曲線及血清標本中IgG、IgA、IgM定量測定:測量沉淀環直徑。
    這種沉淀環直徑與抗原含量的關系不是直線相關,而是對數關系,這種關系有兩種計算方法:
    1)Mancini曲線-適用于大分子抗原和長時間擴散的結果處理。使用方格計算紙劃線,沉淀環直徑的平方與抗原濃度呈線性關系。
    2)使用半對數紙劃線,濃度的對數與沉淀環之間呈線性關系。公式表示:logC/d=K。
   zui終結論:免疫球蛋白的含量,不同批號的參考血清其免疫球蛋白含量不一。

我司研制的各種熒光素標記抗體,均為自己制備的抗血清,經親和層析純化成高純度IgG成分,采用直接標記方法,將異硫氰酸熒光素(FITC,From Sigma ,綠色熒光)共價交聯到抗體IgG分子的賴氨酸基團上,并經過純度、蛋白量、FITC濃度及效價鑒定,為特異、靈敏和穩定的產品。

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