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切片染色后背景太深,如何區分特異性與非特異性著色?

發布時間: 2016-05-10  點擊次數: 1134次

抗體和抗原之間的結合具有高度的特異性,免疫組織化學正是利用了這一原理。先將組織或細胞中的某種化學物質提取出來,以此作為抗原或半抗原,通過免疫動物后獲得特異性的抗體,再以此抗體去探測組織或細胞中的同類的抗原物質。由于抗原與抗體的復合物是無色的,因此還必須借助于組織化學的方法將抗原抗體結合的部位顯示出來,以其達到對組織或細胞中的未知抗原進行定性,定位或定量的研究。本章小編就免疫組化中切片染色問題解答:切片染色后背景太深,如何區分特異性與非特異性著色?  
全片著色是指整個切片全都染上了顏色,著色的強度可深可淺,總之,分不清那些組織是陽性那些組織是陰性。出現這種現象的原因有:  
(1)抗體濃度過高:一抗濃度過高是常見的原因之一。解決辦法是,每次使用新抗體前應當對其工作濃度進行測試,使每一抗體個體化,找到適合自己實驗室的理想工作濃度,既使是即用型的抗體也應如此,不能只簡單的按說明書進行染色。  
(2)抗體孵育時間過長或溫度較高:解決辦法是,嚴格執行操作規程,隨身佩帶報時表或報時鐘,及時提醒,避免因遺忘而造成時間延長?,F在流行的二步法(Polymer)敏感性很高,要求一抗孵育的時間不是傳統的1小時,而是30分鐘,因此,要根據染色結果進行調整。  
(3)DAB變質和顯色時間太長:DAB現用現配,如有沉渣應進行過濾后再用。配制好的DAB不應存放時間太長,因為在沒有酶的情況下,過氧化氫也會 游離出氧原子與DAB

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