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洗滌在ELISA過程中決定著實驗的成敗

發布時間: 2016-07-05  點擊次數: 710次

洗滌在ELISA過程中雖不是一個反應步驟,但卻也決定著實驗的成敗。ELSIA就是靠洗滌來達到分離游離的和結合的酶標記物的目的。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結合的物質,以及在反應過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質。聚苯乙烯等塑料對蛋白質的吸附是普遍性的,而在洗滌時又應把這種非特異性吸附的干擾物質洗滌下來??梢哉f在ELISA操作中,洗滌是zui主要的關鍵技術,應引起操作者的高度重視,操作者應嚴格按要求洗滌,不得馬虎。

小鼠ELISA試劑盒操作中,洗滌是zui主要的關鍵技術,操作時尤為注意:保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板後在吸水紙或毛巾(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干(若使用易掉渣的紙,紙屑會留在板孔中,由于紙屑中含有氧化劑而造成高值陰性。);  
上海勁馬生物提醒大家注意各種試劑盒的洗液不要混用。
如果洗液需要稀釋,應按要求稀釋,所用的水電導率在1.5us/cm 之下,洗液如果結晶應待其融解後配制。室溫溫育的試劑,特別是溫育時間比較短的實驗操作的試劑,加樣對數據的影響比較大。特別要注意加樣問題。  

不好的操作原因:不會正確使用加樣器;血清或血漿標本分離不好即進行加樣;  
手工操作中,加樣板過多造成加樣後放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時);  加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外;小鼠ELISA試劑盒解決辦法:熟悉加樣器的使用,在進行實驗之前用水來練習加樣的快速和準確;試驗前標本需緩慢升溫至室溫,若標本為血清,凍結血清融解後,蛋白質局部濃縮,分布不均,應充分混勻并避免產生氣泡?;鞚峄蛴谐恋淼难鍢吮緫入x或過濾,澄清後再檢測;  
加樣時應將所加物加在小鼠ELISA試劑盒板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可濺出;加樣後及時放入孵箱;加酶試劑後用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干;  
如果采用AT或其他全自動加樣,選擇小鼠ELISA試劑盒或其他後處理儀器加酶試劑;  
標本較多時,請分批操作。每次加樣在兩到三分鐘內完成。加標本時三排一加。每次加完樣進行計時; 
參考小鼠ELISA試劑盒#加樣  
溫 育:  
溫育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附于孔壁,難于清洗徹底;  
溫育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗徹底。

 

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