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酶聯免疫試劑盒測定中試劑的準備Z為關鍵

發布時間: 2016-11-29  點擊次數: 642次

                      酶聯免疫試劑盒測定中試劑的準備zui為關鍵 
在臨床實驗室,對試劑準備一般不太注意,通常的做法是,在實驗時將試劑從冰箱中拿出來即用,而忽略了這種做法有可能影響后面溫育時間不夠的問題,ELISA試劑盒其直接的后果是對一些弱陽性標本的檢測出現假陰性。因此在實驗開始前,將試劑盒先從冰箱中拿出來,在室溫下放置20分鐘以上后,再進行測定,以使試劑盒在使用前與室溫平衡。這樣做的目的,主要是為了在后面的溫育反應步驟中,能使反應微孔內的溫度能較快地達到所要求的高度,以滿足測定要求。其次,上海勁馬生物科技有限公司還指出以下幾點:
ELISA試劑盒的操作步驟
1、取出試劑盒,室溫(20-25℃)放置30分鐘。
2、分組:取出96孔板,根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數,把剩余的板條繼續冷藏處理。分別設標準品組(6個濃度)、空白孔、待測樣品組。
3、標準品的稀釋:準備小試管6 只,依次編好號碼,先在各小試管中加入標準品稀釋液100ul,然后取原濃度標準品100ul加入一只已編好號的試管中,充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第二支試管中,充分混勻;再在該試管中取100ul加入第三只試管中,充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第四只試管中,充分混勻;再在該試管中取100ul加入第五只試管中,充分混勻;然后在該試管中取100ul,棄掉。第六只試管作為0 號標準品。
注:為減少實驗誤差,保證準確性,建議設置復孔。
4、加樣:依照標準品的順序分別加入50ul的標準品溶液于空白微孔中;空白對照孔加入50ul的蒸餾水;其余微孔中先加樣品40ul然后再加生物素標記的抗體10ul。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
5、溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
6、洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30 秒棄去,如此重復5 次,拍干。
7、加酶標溶液:標準品組、待測樣本組各孔中加入50ul的酶標溶液(空白對照孔除外)。
8、溫育:酶標板用封板紙密封后,放入濕盒內于37℃恒溫孵育1小時。
9、洗板:用稀釋后的洗滌液注滿每孔,靜置15-30s,充分清洗酶標板5次,用吸水紙徹底拍干。
10、顯色:各孔加入顯色劑A液50ul后,再加入顯色劑B液50ul。
11、終止:25-37℃下避光反應10-15分鐘,加入50ul終止液。
12、讀板:在450nm波長讀取各孔的OD值。
    目前的商品ELISA試劑盒中的洗板液均需在實驗室使用時對所提供的濃縮液稀釋配制, ELISA中用的蒸餾水或去離子水,包括用于洗滌的,應為新鮮的和高質量的。自配的緩沖液應用pH計測量較正。從冰箱中取出的試驗用試劑應待溫度與室溫平衡后使用。試劑盒中本次試驗不需用的部分應及時放回冰箱保存. 
    勁馬生物不僅研發、生產和銷售實用的試劑盒,而且通過實在的全面服務。主要包括以下幾個方面。

(1)由資深研發人員提供購買建議、測定疑難解決和測定結果分析幫助等及時全面的服務。
 
(2)提供來樣檢測服務。
 
(3)根據用戶需要,及時研發新試劑盒,以滿足用戶研究需求。

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