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選擇實驗抗體真的有那么難嗎?

發布時間: 2017-03-09  點擊次數: 565次

    抗體,是一種由漿細胞(效應B細胞)分泌,被免疫系統用來鑒別與中和外來物質如細菌、病毒等的大型Y形蛋白質,僅被發現存在于脊椎動物的血液等體液中,及其B細胞的細胞膜表面??贵w能識別特定外來物的一個獨特特征,該外來目標被稱為抗原。zui近有很多同學訴苦,不知道該如何選擇抗體,其實只要掌握方法,選擇抗體沒有那么難。今天上海勁就為大家詳細介紹下。

        
1. 一抗選擇
(1)確定抗體的名字,注意中英文名字、別名、亞型等信息。
(2)確定您的實驗類型,Elisa,WB,IHC,ICC,或者是FACS。每種抗體說明書都會列出抗體經驗證過適用的實驗類型,如果抗體說明書沒有提及的應用類型,并不意味著該抗體不適用于此種分析應用類型,而僅是說明尚未經過此種實驗驗證。
(3)確定實驗樣本的種屬,Human,Mouse,Rat等。我們的抗體說明書都列出該抗體驗證過的適用物種,可根據說明書列出已驗證的種屬來選擇適合你實驗的抗體。
(4)樣本抗原蛋白的結構性質。了解樣本抗原蛋白的結構性質有助于選擇zui合適的抗體,待測樣本蛋白的結構域和樣本在提取和處理過程中是否會變性,蛋白空間構象的改變,會影響抗體的免疫親和反應。
(5)單多克隆抗體的選擇。一般單克隆抗體特異性強,但親和力相對小,檢測抗原靈敏度相對就低;而多克隆抗體特異性稍弱,但抗體的親和力強,靈敏度高,但易出現非特異性染色(可以通過封閉等避免)。
2. 二抗選擇
(1)種屬來源。主要根據一抗種屬來源而決定二抗來源,如一抗是小鼠來源,那二抗就買抗小鼠的即可(羊、兔等均可)。
(2)標記物的選擇。有HRP、Biotin、熒光素等標記物。免疫組化,WB二抗主要選擇HRP,Biotin標記的二抗,而免疫熒光染色可按實驗需要選擇不同熒光素標記的二抗,如FITC、Cy3、PE等。
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