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ELISA實驗樣本處理方法,您都會了嗎?

發布時間: 2017-03-09  點擊次數: 582次

    樣本是ELISA實驗的基礎,由于ELISA實驗方法的特殊性,對樣本也比較講究。如果樣本處理不當,將給實驗結果帶來很大的誤差。ELISA實驗的樣本有很多種。如何處理樣本,您都會了嗎?今天上海恒遠就為大家介紹幾種常見的樣本處理方法,各位實驗愛好者們,拿走不謝哦!

        
1、血清
血清是zui常用于ELISA檢測的一類樣本,處理也比較簡單。
用無熱原、無內毒素的試管或離心管采集血液標本,將試管或離心管室溫放置2小時或4℃過夜,使血清析出。(將試管或離心管傾斜放置,使液面橫截面增大,能使血清更大程度的析出。)4℃ 1000×g離心20分鐘,仔細收集上清。建議將血清分裝多份,-20℃或-80℃保存,避免反復凍融。
采血過程中應避免溶血,因為紅細胞裂解時會釋放具有過氧化酶活性的物質,在以HRP為標記的ELISA檢測中會有非特異性的顯色,而導致檢測的不準確性。同時也應避免細菌污染,因為菌體內可能含有內源性的HRP從而導致檢測的假陽性。
2、血漿
用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液標本,標本采集后30min內4℃ 1000×g離心15min,取上清即血漿。將上清分裝多份,-20℃或-80℃保存,避免反復凍融。避免使用溶血或高血脂的標本。
常用的抗凝劑為EDTA、肝素鈉和枸櫞酸鈉等,檢測時還應仔細閱讀試劑盒說明書,檢查試劑盒是否對抗凝劑有特殊要求。
3、細胞培養上清
取細胞培養上清到離心管,1000×g離心20min,除去細胞碎片及雜質,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反復凍融。
4、細胞裂解液
1)  吸去培養板內的培養基,用胰酶消化細胞,加適量培養基將細胞從培養板上吹下來。懸浮細胞可省略。
2)  收集細胞懸液,1000×g離心10min,棄去培養基,用預冷的PBS潤洗3次。
3)  加入適量的預冷PBS或細胞裂解液(臨用前加入蛋白酶抑制劑)重懸細胞。通常6孔板一個孔的細胞量需要150~250μL PBS重懸。
4)  將樣品放入-20℃或-80℃,使樣品冷凍,再放室溫解凍樣品,反復凍融幾次,使細胞充分裂解。也可將樣品進行超聲破碎,以達到裂解的目的。
5)  4℃ 10000×g 離心10min,除去細胞碎片,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反復凍融。
5、組織勻漿液
1)  將組織樣本用PBS (0.01M, PH 7.4) 沖洗,洗去組織表面殘留的血液或雜質。
2)  將組織塊稱重,記錄后剪碎,碎塊應盡量小,便于勻漿得更充分
3)  將組織按一定的比例加入預冷的PBS(臨用前加入蛋白酶抑制劑)勻漿,勻漿時置于冰上或冰浴中。(通常按組織重量:PBS體積=1:9的比例勻漿,例如1g的組織樣本對應9mL的PBS,具體體積可根據實驗需要適當調整,檢測后計算樣品濃度時應乘以相應的稀釋倍數)
4)  吸取勻漿液到離心管,4℃ 5000×g 離心5~10min,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反復凍融。
6、尿液、唾液等其他液體生物樣本
1000×g離心20min,取上清即可檢測。

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