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血清的制備與使用

發布時間: 2021-03-23  點擊次數: 330次

一、血清的制備方法問題。

1、問:我的實驗需要自己制備一些血清用于培養細胞,有沒有人知道用于培養細胞的血清需要怎樣的制備過程?

答:自己制備血清當心污染啊。如果無菌條件好的話,用靜置析出方法就行。

2、問:一般我們用得胎牛血清用前還要滅活,我想用大鼠的血,不知道要不要滅活?

答:你直接把采來的血液在離心管里4℃過夜,離心,取上清,在無菌過濾,也可滅活,然后分裝凍存,用時再配。

3、問:如果滅活會不會對血清中的一些因子有損傷?

答:加熱可以滅活補體系統。激活的補體參與溶解細胞事件,刺激平滑肌收縮,細胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細胞和巨噬細胞。在進行免疫學研究、培養ES細胞、昆蟲細胞和平滑肌細胞時,推薦使用熱滅活血清。滅活一般不會對血清中的一些因子損傷的。


二、心肌細胞原代培養時血清的使用問題。

1、問:在進行心肌細胞原代培養時,需要用含血清的培養基中止胰酶的消化作用,我現在使用的是含血清10%的培養液,但近日看北醫一個細胞培養的課件發現,有用1%血清培養液進行中止消化的,想問一下,1%的是否可以,效果是否有保證?這樣確實能節省不少血清的。

答:關于心肌細胞元代培養的FBS問題:

(1)1%的血清完全培養基可不可以,得看你胰酶的用量。但是在心肌細胞元代培養就不行。 10%的FBS完全培養基效果都不太好,開始心肌細胞元代培養需要高濃度的FBS,20%左右,但這就有出現另一個問題,在FBS完全培養基中,成纖維細胞呈優勢細胞,須得在培養基加入適量的BrdU以抑制其生長,純化心肌細胞。

(2)FBS的作用不僅僅是拿來中和胰酶,只是FBS中的一些蛋白質如α-巨球蛋白等有抑制胰酶活性作用。

(3)元代心肌細胞培養的FBS使用,有講究:剛開始使用20%左右的高濃度的FBS,后逐漸遞減為無血清的DMEM/F-12培養基培養。

2、問:我胰酶的用量是0.08% ,并混和了0.08%的膠原酶。FBS要高濃度遞減是否是說的在細胞培養中啊,難道在消化時終止也需要如此高的濃度嗎,還有,我的BRDU只用到48小時就不用了,因為擔心其損傷太大,可以持續用多久呢?

答:我用10%FBS終止的,然后差速1h,然后還是用10%FBS的HG-dmem養的,沒有用brdu,心肌細胞還是比較多和穩定的,我第3天就可以用,第2天晚上看就會有搏動。

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