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凍存的原代細胞應該如何培養

發布時間: 2021-05-11  點擊次數: 156次

  原代細胞(primary culture cell)是指從機體取出后立即培養的細胞。有人把培養的第1代細胞與傳10代以內的細胞統稱為原代細胞培養。原代細胞不僅廣泛應用于分子、細胞生物學和生物醫學基礎研究,如蛋白質組學、基因組學、細胞株(系)研究、DNA,RNA和遺傳學研究等。

一、凍存原代細胞的培養

1.將一管細胞從液氮罐中取出,注意保護手和眼睛。

2.將凍存管快速的放入37℃水浴中,輕輕握住并旋轉,直到管內物體完全融化。

3.將凍存管立即從水浴中拿出,擦干,轉入無菌環境。

4.用70%的酒精沖洗凍存管,然后擦去多余酒精。

5.打開蓋子,注意手指不要碰到里面的螺紋(注意,由于凍存管有負壓,開蓋時可能會有少量溢出,這是正常現象)。

6.用多聚賴氨酸包被培養瓶。多數細胞推薦的接種密度為每平方厘米5000個細胞。

7.蓋好培養瓶的蓋子,輕輕搖晃培養瓶以使細胞分布均勻。若需要氣體交換可打開蓋子。

8.將培養瓶放入培養箱中。

9.放入培養箱后第6-16小時更換一次培養基,以去除殘留的二甲基亞楓和未貼壁的細胞。 


二、原代細胞的組織塊培養法:

1.組織塊接種后的前3天,在觀察和移動的過程中,注意不要引起液體的振蕩。要避免經常翻動和振動,否則組織塊不易附著于瓶壁上或附著后也會脫落飄起。

2.加入的培養液不宜過多,避免浸泡的組織塊受輕微的波動而脫落下來。

3.當細胞向外遷徙出來后要注意記錄并去除漂浮的組織塊和殘留的細胞,它們產生的有毒物質會影響原代細胞的生長。

4.為促進組織塊盡快粘貼在培養瓶皿上,可以在種植前先將膠原薄層涂在培養瓶底壁上。

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