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基因工程功能試劑的技術方法

發布時間: 2013-01-08  點擊次數: 1321次
  基因工程功能試劑的技術方法
  
  80年代后人們開始使用基因工程技術制備抗體,并進而將抗體分子片斷與其它蛋白(或另一種抗體分子)融合得到多功能試劑,到目前為止,基因工程抗體在免疫測定上的應用尚處于一個初級階段。且主要是將抗體與其它蛋白以融合蛋白形式表達而得到多功能試劑,如澳大利亞學者應用基因工程技術制備了抗人紅細胞抗體與HIV-1gpN41的融合蛋白。這種重組蛋白,即基因工程雙功能試劑,在此基礎上,建立了快速,靈敏和特異的自身紅細胞凝集試驗(AGEN).
  
  3.1HIV-ELISA抗原/抗體試劑1998年,美國首先研制第四代試劑,對檢測HIV的同時檢測P24(核心)抗原,故稱HIV抗原/抗體試劑,國內已有引進.抗原組成:gp160gp36gp170和單克隆抗p24抗體包被.
  
  3.1.2P24抗原測定采用夾心法ELISA,即將將純化的已知抗體包被,當加入帶測血清后,若血清中含有P24與包被抗體形成抗原抗體復合物,再加入酶(HRP)標記HIV抗體。在抗原上又結合了酶標記的抗體,加底物顯色后在酶標儀上讀結果。近來為提高檢測血清中P24抗原的敏感性,將血清中免疫復合物(ICD)解離后再進行測定。發展了(ICD)P24抗原測定技術。
  
  3.1.3抗HIV-ELISA檢測試劑盒目前對HIV的檢測原料有了較大改進,
  
  主要如下:
  
 ?。?)可用于檢測血清或血漿中HIVIgM亞特異性抗體和檢測HIV-1、2和多種亞型。
  
 ?。?)標記的抗原:a.含HIV-1B亞型gp41和P24的HIV-1重組融合蛋白。b.可特異性檢測血清或血漿中HIVM群的抗體,絕大多數HIV-1.0群和HIV-2群的抗體。c.gp36免疫調控區的HIV-2多肽可測定特異性的HIV-2抗體。d.gp41的倆段HIV1.0群多肽,可測特異性HIV1.0群的抗體和HIV1M群的抗體。從以上抗原設計保證HIV的來自不同亞型/或區域的抗原亞型抗體的檢測。減少了變異株的漏檢。HIV-1.0.2對759份各類臨床樣品包括401份HIV-1感染不同階段病人樣品,204分HIV-2感染不同階段病人樣品,和154份與HIV無關的其他疾病患者的樣品的檢測結果。特異性:99.93%靈敏度:100%對歐洲血液中心的8842份常規鮮血者樣品用HIV-1.0.2進行評價篩選,并經確認實驗獲得的結果。
  
  3.1.4HIV確認試劑—免疫印記(WB或RIBA)試劑判斷標準我國HIV抗體陽性:至少二條膜帶(即gp160/gp120)或至少一條膜帶和p24(核心)帶同時出現美國HIV-1陽性(任何兩個中有二條帶(P24gp41gp120/gp160),HIV-2無陽性WHO:HIV-1陽性(不管有無核心帶或酶帶,但有兩條膜帶)HIV-2陽性(不管有無核心帶或酶帶,單有兩條膜帶即為陽性)
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