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人干擾素調節因子ELISA試劑盒說明書

發布時間: 2013-02-28  點擊次數: 971次
  人干擾素調節因子ELISA試劑盒使用說明書
  
  本試劑盒僅供研究使用。
  
  檢測范圍:96T
  
  3pg/ml-160pg/ml
  
  試劑盒組成
  
  130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶
  
  2酶標試劑6ml×1瓶8標準品(160pg/ml)0.5ml×1瓶
  
  3酶標包被板12孔×8條9標準品稀釋液1.5ml×1瓶
  
  4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份
  
  5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張
  
  6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個
  
  標本要求
  
  1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
  
  2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
  
  人干擾素調節因子ELISA試劑盒操作步驟
  
  1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
  
  80pg/ml5號標準品150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
  
  40pg/ml4號標準品150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
  
  20pg/ml3號標準品150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
  
  10pg/ml2號標準品150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
  
  5pg/ml1號標準品150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
  
  2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
  
  3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
  
  4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
  
  5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
  
  6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
  
  7.溫育:操作同3。
  
  8.洗滌:操作同5。
  
  9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
  
  10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
  
  11.測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
  
  計算
  
  以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。
  
  人干擾素調節因子ELISA試劑盒注意事項
  
  1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
  
  2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
  
  3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。
  
  4.請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5)。
  
  5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
  
  6.底物請避光保存。
  
  7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
  
  8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
  
  9.本試劑不同批號組分不得混用。
  
  10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準。
  
  人干擾素調節因子ELISA試劑盒保存條件及有效期
  
  1.試劑盒保存:;2-8℃。
  
  2.有效期:6個月
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