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血清保存注意事項

發布時間: 2013-03-08  點擊次數: 2134次

血清簡介

各項質量指標符合2005版《中華人民共和國藥典》第三部附錄的要求。

  1、性狀、外觀 淺黃色澄清、無溶血、無異物稍粘稠液體。

  2、蛋白質含量 3.5%~5.0%( w/v)

  3、血紅蛋白含量 ≤ 0.02%( w/v)

  4、無菌檢驗 陰性

  5、支原體檢驗 陰性

  6、細菌內毒素 ≤5(EU/ml)

  7、牛腹瀉病毒 陰性

  8、大腸桿菌噬菌體 陰性

  9、支持細胞增殖(Sp2/0-Ag14) 生長曲線(接種濃度)zui大增殖濃度≥2.5×106 個/ml

  細胞倍增時間 ≤15h

  克隆率 ≥85%

血清的保存應該注意以下幾點:   

(1)需要長期保存的血清必須儲存于-20℃ - 70℃ 低溫冰箱中.4℃冰箱中保存時間切勿超過1個月.由于血清結冰時體積會增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預留一定體積空間,否則易發生污染或玻璃瓶凍裂.   

(2)熱滅活是指56℃, 30分鐘加熱已完全解凍的血清.加熱過程中須規則搖晃均勻.此熱處理的目的是使血清中的補體成分(complement)滅活.除非必須,一般不建議作此熱處理,因為熱處理會造成血清沉淀物顯著增多,而且還會影響血清的質量.補體參與反應有:細胞毒作用, 平滑肌細胞收縮, 肥大細胞和血小板釋放組胺, 增強吞噬作用, 促進淋巴細胞和巨噬細胞發生化學趨化和活化.   

(3)瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃ 至 -70℃ 低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室溫,待全部溶解后再分裝.在溶解過程中需不斷輕輕搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沉淀的發生.切勿直接將血清從-20℃進入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質凝集而出現沉淀.   

(4)一般廠商提供的血清為無菌,無需再過濾除菌.如發現血清有懸浮物,則可將血清加入培養液內一起過濾,切勿直接過濾血清.   

(5)血清中的沉淀物 絮狀物:主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會影響血清本身的質量.可用離心3000rpm, 5分鐘去除,也可不用處理. 顯微鏡下"小黑點":經過熱處理過的血清,沉淀物的形成會顯著增多.有些沉淀物在顯微鏡下觀察象"小黑點",常誤認為血清受污染.一般情況下,此小黑點不會影響細胞生長,但如果懷疑血清質量,則應立即停止使用,更換另一批號的血清.   

(6)切勿將血清在37℃放置太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中的有效成分會破會而影響血清質量.


定義: 采自胎牛的血清。含有多種生長因子,常用于體外細胞培養。

應用學科:細胞生物學(一級學科);細胞培養與細胞工程(二級學科)

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