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兔子腫瘤壞死因子α試劑盒原理

發布時間: 2013-04-03  點擊次數: 686次

 兔子腫瘤壞死因子α試劑盒免費代測和快遞送貨上門服務

【規格】96T/48T(兩種統一規格)

【種屬】馬鈴薯、鹿、羊、雞、鴨、魚、人、大鼠、小鼠、豚鼠、倉鼠、裸鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛等動植物。

【標本】血清、血漿、細胞上清液、尿液、體液、灌洗液、腦脊髓、心房水、胸房水、組織等

注:標本必須為液體,不含沉淀

性能:

 1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.95以上。

2.批內與批見應分別小于9%11%

兔子腫瘤壞死因子α試劑盒實驗原理:

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中兔腫瘤壞死因子αTNF-α)水平。用純化的兔腫

瘤壞死因子αTNF-α)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入腫

瘤壞死因子α,再與 HRP 標記的羊抗兔抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過徹

底洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB HRP 酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成

zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的兔腫瘤壞死因子α呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下

測定吸光度(OD 值),通過標準曲線計算樣品中兔腫瘤壞死因子αTNF-α)濃度。

兔子腫瘤壞死因子α試劑盒操作步驟:

1. 標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔 10孔,在*、第二孔中分別加標

準品 100μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液 50μl,混勻;然后從*孔、第二

孔中各取 100μl 分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液 50μl,

混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 棄掉,再各取 50μl 分別加到第五、第六孔

中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液 50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各

50μl 分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液 50μl,混

勻后從第七、第八孔中分別取 50μl 加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準

品稀釋液 50μl,混勻后從第九第十孔中各取 50μl 棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為 50μl,

濃度分別為 15μg/L,10μg/L ,5μg/L,2.5μg/L,1.25μg/L)。

2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣

品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品 10μl(樣

品zui終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混

勻。

3. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30分鐘。

4. 配液:將 20倍濃縮洗滌液用蒸餾水 20 倍稀釋后備用。

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此

重復 5 次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶標試劑 50μl,空白孔除外。

7. 溫育:操作同 3。

8. 洗滌:操作同 5。

9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色

15分鐘.

10. 終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

11. 測定:以空白空調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止

液后 15分鐘以內進行。

 

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