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免疫組織化學染色方法

發布時間: 2013-05-02  點擊次數: 1198次
免疫組織化學染色方法
 免疫組織化學染色法是指在抗體上結合熒光或可呈色的化學物質,利用免疫學原理中抗原和抗體間專一性的結合反應,檢測細胞或組織中是否有目標抗原的存在,此方式不只可以用來測知抗原的表現量也可觀察抗原所表現的位置。只要是能夠讓抗體結合的物質,也就是具有抗原性的物質包括蛋白質、核酸、多糖、病原體等都可偵測。免疫組織化學的優勢在于專一性、靈敏度、簡便快速以及成本低廉,所以廣為醫院采用,通常是借由特定的腫瘤標記來篩選癌癥。
免疫組織化學染色方法實驗原理:免疫細胞化學(immunocytochemistry)是根據免疫學原理,利用抗體同特定抗原專一結合,對抗原進行定位測定的技術??乖饕獮榇蠓肿踊蚺c大分子相結合的小分子;抗體則是由漿細胞針對特定的抗原分泌的γ球蛋白。如果將抗體結合上標記物,再與組織中的抗原發生反應,即可在光鏡或電鏡下顯示出該抗原存在于組織中的部位。
常用的標記物有熒光素和酶。熒光素標記的稱為免疫熒光法(immunofluorescent technique),常用的螢光素有異硫氰酸熒光素(fluorescein isothiocyanate)、羅丹明(rhodamine)等。酶標記的稱為酶標免疫法(enzyme-labeled antibody method),常用的酶有辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase),酶與底物發生反應后形成不透明的沉積物,從而顯示出抗原存在的部位。
抗體與抗原的結合方法可分為直接法和間接法兩種,直接法是將帶有標記的抗體與抗原反應,顯示出抗原存在的部位。而間接法則是在抗體抗原初級反應的基礎上,再用帶標記的次級抗體同初級抗體反應,從而使初級反應得到放大,顯示增強。

 

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