歡迎光臨上海勁馬ELISA試劑盒供應商(上海勁馬實驗設備有限公司)網站!
全國服務咨詢熱線:

13817140470

技術文章 / article 您的位置:網站首頁 > 技術文章 > ELISA試劑盒基礎知識您了解多少

ELISA試劑盒基礎知識您了解多少

發布時間: 2013-11-15  點擊次數: 971次

上海勁馬何為感謝新老客戶對我司的大力支持,近日特意抽空與科研愛好者在線探討關于ELISA試劑盒在實驗中可能遇到的問題。以下是何與愛好者們進行的知識問答,希望對大家也能有所幫助。
:在ELISA試劑盒實驗前我們需要的基本試劑有哪些?
:捕獲抗體
檢測抗體
鏈霉親和素-HRP
標準品
96孔酶標板:選擇具有中等或高吸附力的酶標板,禁止使用培養板
包被溶液:0.1M的PBS或者TBS,PH9.6 0.05M碳酸鹽緩沖液
阻斷溶液:含3%BSA的TTBS或PBS,或者含有3-5%血清的PBS
標準品/標本稀釋液:含1%BSA的TTBS或PBS
洗液:含0.02%吐溫20的0.002M咪唑鹽溶液或者PH7.4的PBS溶液
底物溶液:兩組份或者一組份的TMB顯色液
終止液:2N的硫酸或者1%HCl溶液
封板膜
ELISA試劑盒血清標本采集需要注意什么呢?
:1) 要注意避免出現嚴重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團,其有類似過氧化物的活性,因此,在以HRP為標記酶的ELISA測定中,如血清標本中血紅蛋白濃度較高,則其就很容易在溫育過程中吸附于固相,從而與后面加入的HRP底物反應顯色。
2) 樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細菌污染,一則細菌的生長,其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白產生分解作用;二則一些細菌的內源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會對用相應酶作標記的測定方法產生非特異性干擾。
3) 血清標本如是以無菌操作分離,則可以在2~8℃下保存一周,如為有菌操作,則建議冰凍保存。樣本的長時間保存,應在-70℃以下。
4) 冰凍保存的血清標本須注意避免因停電等造成的反復凍融。標本的反復凍融所產生的機械剪切力將對標本中的蛋白等分子產生破壞作用,從而引起假陰性結果。此外,凍融標本的混勻亦應注意,不要進行劇烈振蕩,反復顛倒混勻即可。
5) 標本在保存中如出現細菌污染所致的混濁或絮狀物時,應離心沉淀后取上清檢測。
:測抗體可以用什么方法,有操作步驟么?謝謝。
:捕獲法測IgM抗體 
血清中針對某些抗原的特異性IgM常和特異性IgG同時存在,后者會干擾IgM抗體的測定。因此測定IgM抗本多用捕獲法,先將所有血清IgM(包括異性IgM和非特異性IgM)固定在固相上,在去除IgG后再測定特異性IgM。操作步驟如下: 
(1)將抗人IgM抗體連接在固相載體上,形成固相抗人IgM。洗滌。 
(2)加入稀釋的血清標本:保溫反應后血清中的IgM抗體被固相抗體捕獲。洗滌除去其他免疫球蛋白和血清中的雜質成分。 
(3)加入特異性抗原試劑:它只與固相上的特異性IgM結合。洗滌。 
(4)加入針對特異性的酶標抗體:使之與結合在固相上的抗原反應結合。洗滌。 
(5)加底物顯色:如有顏色顯示,則表示血清標本中的特異性IgM抗體存在,是為陽性反應。 
:血清的類別有哪些還有要怎么鑒別呢?
:血清的類別:
胎牛血清、透析型胎牛血清 、天然低IGG胎牛血清 、干細胞培養胎牛血清 、特殊用途胎牛血清 、活性炭/葡萄糖處理胎牛血清 、胎牛血清替代物 、小牛血清 、新生牛血清 、加強型小牛血清 、補鐵小牛血清 、成牛血清 、供體馬血清 、兔血清 、雞血清 、豬血清 、馬血清 、其他動物血清 、合成血清替代品
鑒別方法:
血液凝固析出的淡黃色透明液體。如將血液自血管內抽出,放入試管中,不加抗凝劑,則凝血反應被激活,血液迅速凝固,形成膠凍。凝血塊收縮,其周圍所析出之淡黃色透明液體即為血清,也可于凝血后經離心取得。在凝血過程中,纖維蛋白原轉變成纖維蛋白塊,所以血清中無纖維蛋白原,這一點是與血漿zui大的區別。而在凝血反應中,血小板釋放出許多物質,各凝血因子也都發生了變化。這些成分都留在血清中并繼續發生變化,如凝血酶原變成凝血酶,并隨血清存放時間逐漸減少以至消失。這些也都是與血漿區別之處。但大量未參加凝血反應的物質則與血漿基本相同。為避免抗凝劑的干擾,血液中許多化學成分的分析,都以血清為樣品。
以上是勁馬何與部分愛好科研的網友進行的專業知識交流,如果您也對ELISA酶聯免疫試劑盒操作有什么疑問都可在線咨詢我司工作人員。

上海勁馬專業供應ELISA檢測試劑盒,ELISA酶聯免疫試劑盒,食品檢測試劑盒,微生物培養基,進口培養基等,試劑盒種屬有:人ELISA試劑盒、大鼠ELISA試劑盒、小鼠ELISA試劑盒、ELISA試劑盒價格、豬ELISA試劑盒,雞ELISA試劑盒等,想了解更多關于ELISA酶聯免疫試劑盒的資訊可隨時關注我司動態www.ninjatoes.com

技術支持:安防展覽網   sitemap.xml   管理登陸
© 2021 版權所有:上海勁馬ELISA試劑盒供應商(上海勁馬實驗設備有限公司)( www.ninjatoes.com)   備案號:滬ICP備15015681號-5

聯系我們

contact us

咨詢電話

13817140470

掃一掃, 添加微信

返回頂部