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小鼠骨髓的染色體制備實驗過程詳解

發布時間: 2014-03-19  點擊次數: 827次

上海勁馬生物用小鼠骨髓的染色體制備作實驗過程詳解,為大家在這一領域提供必要的實驗解說。歡迎點擊進入了解,參考》

1. 實驗原理 小鼠骨髓細胞有高度的分裂活性,并且數量非常多,因此不必進行體外培養,可直接觀察到分裂期細胞。處于分裂期的細胞經秋水仙素處理,阻斷紡錘絲的形成,使細胞分裂停止于中期,此時染色體達到zui大收縮,具有典型的形態。低滲處理使細胞破裂,便于染色體分散。該方法在臨床上多用于白血病的研究,也可用于觀察毒性物質對機體遺傳物質——染色體損傷的狀況。
小鼠染色體2n=40,均為端著絲粒染色體, 雄性為40,XY,雌性為40,XX。
2. 實驗試劑與器材 顯微鏡、恒溫水浴鍋、低速離心機、電子天平、解剖器械(搪瓷解剖盤、剪刀、鑷子),注射器、針頭、試管、試管架、滴管、載玻片。
0.85%生理鹽水、固定液(甲醇∶冰醋酸為3∶1)、PBS(pH6.8)、Giemsa染液、秋水仙素(以100μg/ml的濃度溶于0.85%生理鹽水中)、0.075mol/L KCl。
3. 實驗方法與步驟
(1)秋水仙素處理:取骨髓前3h先給小鼠腹腔注入秋水仙素,注射劑量為100μg/kg動物體重。
(2)取骨髓:用損傷脊髓法處死小鼠,然后用剪刀剪開大腿上的皮膚和肌肉,取出大腿骨,用一小塊紗布搓干凈附在骨上的肌肉碎渣。剪掉股骨兩端膨大的關節頭,然后用注射器吸取5ml 0.85%生理鹽水,插入股骨一端,將骨髓細胞沖洗至10ml的離心管中??芍貜蜎_洗多次,直至骨髓腔呈白色為止。
(3)低滲處理:將所獲得的細胞懸浮液以 1000rpm離心10min,吸去上清液,留0.2ml沉淀物,加0.075mol/L KCL 溶液(37℃)至8ml刻度,將細胞沉淀物吹散打勻,在37℃水浴低滲25min。
(4)固定:低滲處理后,立即加入1ml新配制且預冷的固定液,抽打均勻,然后1000 rpm離心10min,棄上清。沿管壁加固定液至6ml, 吹散細胞后靜止固定10min,即*次固定。按上述條件離心,去上清液,再次加入固定液至6ml,進行第二次固定。10min后離心吸去上清液,留0.2ml沉淀物,再往沉淀物中滴加4滴固定液,沖勻制成細胞懸液。
(5)滴片:取事先在冰箱中預冷的載玻片,從約15cm高處向每個載玻片上滴1~2滴細胞懸液于粘有冰水的載玻片上,晾干。
(6)染色:取制片平放在玻璃板上,用1∶9 Giemsa染液染色20min,流水沖洗后晾干。
(7)觀察:小白鼠染色體的形態特征,并計算2n的染色體數目。

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