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勁馬解析手工洗板法與自動洗板法的差別

發布時間: 2014-10-30  點擊次數: 1038次

Elisa酶聯免疫試劑盒試驗中,洗板是非常重要的過程。酶聯免疫試驗(ELISA)洗滌過程雖不是一個反應過程,但卻也決定著實驗的成敗?。ELISA就是通過洗滌來達到分離游離和結合的酶標記物的目的,通過洗滌以清除殘留在微孔板中未能與固相抗原或抗體相結合的物質,以及在反應過程中的非特異性吸附于固相載體上的干擾物質。聚苯乙烯對蛋白質的吸附是普遍的,在ELISA測定的反應過程中應盡量避免非特異性吸附,洗滌時又應將這些非特異性吸附的干擾物質洗滌掉。由于“ELISA檢測試劑盒”具有的特異性,抗原抗體的結合發生在抗原的決定簇與抗體的結合位點之間。那么ELISA檢測試劑盒洗板方法有以下兩點。在ELISA操作中,洗滌是非常關鍵的,應引起操作者的高度重視。

手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內,浸泡1-2分鐘,根據需要,重復此過程數次。
上海勁馬生物以
Elisa酶聯免疫試劑盒為例:
針對手工洗板進行解答.手工法按試劑說明書嚴格操作,稀釋液用蒸餾水按1:20稀釋濃縮洗液,適量置于臉盆之中。從37℃水浴溫箱中拿出溫浴到時的反應板,到洗滌池處,放開自來水約1 min,然后快速甩掉反應液,即用自來水沖洗數次,甩掉水并用干凈的毛巾吸干,放人配好洗滌液的臉盆之中,浸泡5 min~10min,然后將反應板取出,甩掉洗滌液,再用自來水沖洗數次,用干凈吸水的毛巾拍干(多次)反應板。加顯色劑A、B后,振蕩封板,放入37℃水浴溫箱10 min,取出,加終止液,振蕩,上酶標儀讀板,觀察結果。按感染性醫療廢物處理洗滌池的液體及用過的洗滌液:加入健之素(500 mg/片),使其濃度達到2 500 mg/L,浸泡24 h,收集起來,交醫療廢物處理公司處理。

自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。待檢樣本:體液、血清、血漿、細胞培養上清液、尿液、組織勻漿、心房水標本等,洗板機法按試劑說明書嚴格操作,稀釋液用蒸餾水按1:20稀釋濃縮洗液,適量置于洗板機洗液瓶里。將反應到時的反應板取出,用洗板機洗板5次,每次浸泡1 min,取出,用干凈的毛巾拍干(多次)反應板。加顯色劑A、B后,振蕩封板,放入37℃水浴溫箱10 min,取出,加終止液,振蕩,上酶標儀讀板,觀察結果。

1.2.3假陽性排除實際工作中,我們發現假陽性一般顯色都較淡,即弱陽性;為了排除假陽性,將753例中18例弱陽性(酶標儀讀數0.105<OD<0.511)的標本取出,觀察標本的基本情況,看是否有纖維蛋白、紅細胞、溶血等情況;并做相應處理后,重新離心5 min(2 500 Wmin),重做2次,分別測定,一次用手工洗板,一次用洗板機洗板,以排除是否因洗板差異造成的弱陽性。
1.2.4假陰性的排除753例標本檢測中,每板都做雙孔陰性對照和陽性對照,然后用兩種方法洗板,結果兩種洗板方法都未出現陽性對照陰性結果的現象,而陰性對照全部陰性。
1.3統計方法數據分析使用SPSS 11.5統計軟件統計處理。

Elisa酶聯免疫試劑盒針對手工洗板與自動洗板做出的結果比較

兩種洗板方法HBsAg檢測結果比較753例檢測標本中,兩種方法洗板以后,手工法陽性52例,洗板機法陽性53例,經r檢驗∥=0.01,P>0.05,兩種洗板方法差異無顯著性
根據上海勁馬生物在
Elisa酶聯免疫試劑盒檢驗當中,手工法洗板和洗板機洗板,沒有本質上的差別,兩種方法結果都可靠。但手工法簡單、經濟、、實用,值得規范、推廣。

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