歡迎光臨上海勁馬ELISA試劑盒供應商(上海勁馬實驗設備有限公司)網站!
全國服務咨詢熱線:

13817140470

資料下載 / down 您的位置:網站首頁 > 資料下載 > 上海勁馬告訴您ELSIA試劑盒操作步驟與樣品收集,處理及保存方法

上海勁馬告訴您ELSIA試劑盒操作步驟與樣品收集,處理及保存方法

發布時間: 2013/2/28  點擊次數: 368次      文件下載    圖片下載    
  ELISA試劑盒操作步驟
  
  方法一雙抗體夾心法
  
  1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1~10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml,4℃過夜。次日,棄去孔內溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗滌,下同)。
  
  2.加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。
  
  3.加酶標抗體:于各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小時,洗滌。
  
  4.加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分鐘。
  
  5.終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。
  
  6.結果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調零后測各孔OD值,若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。
  
  方法二間接法
  
  1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃過夜;
  
  2.次日洗滌3次;
  
  3.加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌;
  
  4.(同時做空白、陰性及陽性孔對照)于反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.1ml;
  
  5.37℃孵育30-60分鐘,洗滌;
  
  6.’zui后一遍用DDW洗滌。
  
  其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。
  
  ELISA試劑盒樣品收集,處理及保存方法
  
  1、血清:操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血紅細胞迅速小心地分離。
  
  2、血漿:EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
  
  3、細胞上清液:1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
  
  4、組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液。
  
  5、保存:如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
  
  自備材料
  
  1.蒸餾水。
  
  2.加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
  
  3.振蕩器及磁力攪拌器等。
技術支持:安防展覽網   sitemap.xml   管理登陸
© 2021 版權所有:上海勁馬ELISA試劑盒供應商(上海勁馬實驗設備有限公司)( www.ninjatoes.com)   備案號:滬ICP備15015681號-5

聯系我們

contact us

咨詢電話

13817140470

掃一掃, 添加微信

返回頂部