歡迎光臨上海勁馬ELISA試劑盒供應商(上海勁馬實驗設備有限公司)網站!
全國服務咨詢熱線:

13817140470

資料下載 / down 您的位置:網站首頁 > 資料下載 > 人轉移趨化生長因子beta1試劑盒使用說明書

人轉移趨化生長因子beta1試劑盒使用說明書

發布時間: 2012/12/26  點擊次數: 441次      文件下載    圖片下載    

Human轉移趨化生長因子beta1TGF-beta1ELISA檢測試劑盒

本試劑僅供研究使用

 

試驗原理

        TGF-beta1試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗(ELISA.已知TGF-beta1濃度的標準品、未知濃度的樣品 加入微孔酶標板內進行檢測。先將TGF-beta1和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然后加入底物A、B,和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中TGF-beta1的濃度呈比例關系。

 

elisa檢測試劑盒內容及其配制

試劑盒成份

96孔配置

48孔配置

96/48人份酶標板

1塊板(96T

半塊板(48T

塑料膜板蓋

1

半塊

標準品:1000pg/ml

1瓶(1.0ml

1瓶(0.5ml

空白對照

1瓶(1.0ml

1瓶(0.5ml

標準品稀釋緩沖液

1瓶(8.0ml

1瓶(4.0ml

生物素標記的抗TGF-beta1抗體

1瓶(8.0ml

1瓶(4.0ml

親和鏈酶素-HRP

1瓶(12ml

1瓶(5ml

洗滌緩沖液

1瓶(20ml

1瓶(10ml

底物A

1瓶(6.0ml

1瓶(3.0ml

底物B

1瓶(6.0ml

1瓶(3.0ml

終止液

1瓶(6.0ml

1瓶(3.0ml

 

自備材料

1.  蒸餾水。

2.  加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。

3.  振蕩器及磁力攪拌器等。

4.

 

樣品收集、處理及保存方法

 

1、 血清……操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原

和內毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血紅

 

細胞迅速小心地分離。

2、  血漿……EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3、  細胞上清液……1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4、  組織勻漿……將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液。

 5、  保存……如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

 

操作注意事項

 

   試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。

   實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。

   不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。

   使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。

   使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

   底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。

   加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。

   按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

 

 

 

 

安全性

 

1.   避免直接接觸終止液和底物A、B,一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。

2.   實難中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

3.   不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

 

試劑的準備

 

1.   標準品:標準品的系列稀釋應在實驗時準備,不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行:

1000

pg/ml

6號標準品)

原倍濃度不用稀釋直接加入50ul

500

pg/ml

5號標準品)

100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液

250

pg/ml

4號標準品)

100ul5號標準品加入100ul的標準品稀釋液

125

pg/ml

3號標準品)

100ul4號標準品加入100ul的標準品稀釋液

62.5

pg/ml

2號標準品)

100ul3號標準品加入100ul的標準品稀釋液

31.5

pg/ml

1號標準品)

100ul2號標準品加入100ul的標準品稀釋液

0

pg/ml

(空白對照)

原倍濃度不用稀釋直接加入50ul

 

 

2.   洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。

 

試劑盒性能

 

1.   靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。

2.   特異性:不與其它細胞因子反應。

3.   重復性:板內、板間變異系數均小于10%。

 

操作步驟

 

1.   使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。

2.   根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。

3.   加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37溫育45分鐘。

4.   甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作4次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。

5.   每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37溫育30分鐘。

6.   甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作4次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。

7.   每孔加入底物A、B50ul,輕輕振蕩混勻,37溫育5分鐘。避免光照。

8.   取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。

9.   450nm波長處測定各孔的OD值。

 

結 果 判 斷 與 分 析

 

1、  儀器值:于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD

2、  以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的TGF-beta1標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的TGF-beta1含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度,再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。

3、  檢測值范圍: 0-1000pg/ml

4、  敏感度:3.9pg/ml


 

技術支持:安防展覽網   sitemap.xml   管理登陸
© 2021 版權所有:上海勁馬ELISA試劑盒供應商(上海勁馬實驗設備有限公司)( www.ninjatoes.com)   備案號:滬ICP備15015681號-5

聯系我們

contact us

咨詢電話

13817140470

掃一掃, 添加微信

返回頂部